Αντιδραστήριο επιμόλυνσης PEI 40K

Το PEI 40K Transfection Reagent (γραμμικό αντιδραστήριο διαμόλυνσης πολυαιθυλενοϊμίνης) είναι ένα εξαιρετικά φορτισμένο κατιονικό πολυμερές με μοριακό βάρος 40,000 με βάση τη γραμμική πολυαιθυλενοϊμίνη, η οποία είναι θετικά φορτισμένη και μπορεί να δεσμεύσει αποτελεσματικά αρνητικά φορτισμένα νουκλεϊκά οξέα για να σχηματίσει ένα σύμπλοκο με και τα εισάγουν στα κύτταρα και είναι κατάλληλο για τη διαμόλυνση του πλασμιδικού DNA κύτταρα. Το αντιδραστήριο μορφομετατροπής PEI 40K (γραμμική πολυαιθυλενοϊμίνη) έχει χαμηλή κυτταροτοξικότητα, υψηλή αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης και χαμηλό κόστος, καθιστώντας το πολύ οικονομικό σε σύγκριση με τα αντιδραστήρια επιμόλυνσης που βασίζονται σε λιπόσωμα. Έχει επικυρωθεί ότι το γραμμικό αντιδραστήριο μορφομετατροπής PEI 40K χρησιμοποιείται ευρέως σε μια ποικιλία κυτταρικών σειρών συμπεριλαμβανομένων των HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/ Κύτταρα 3T3, Sf9, HepG2 και Hela, κ.λπ., με αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης τόσο υψηλή όσο 80%~90%. Η συγκέντρωση του PEI 40K, του κύριου συστατικού αυτού του προϊόντος, είναι 1 mg/mL.

Αποστολή με υγρό πάγο. Αποθήκευση σε -20 βαθμό , ισχύει για 6 μήνες. Ή αποθηκεύστε στους 4 βαθμούς, ισχύει για 3 μήνες.

1. Προετοιμασία πριν από τη διαμόλυνση προσκολλημένων κυττάρων (6-πλάκα φρεατίου, πίνακας αναφοράς για άλλες προδιαγραφές):

Α) Την ημέρα πριν από τη διαμόλυνση, τα κύτταρα ήταν κατάλληλα να φυτευτούν ομοιόμορφα στις πλάκες πόρων σε

κατάλληλη πυκνότητα για σύγκλιση στο 70 – 85% κατά την επίσημη επιμόλυνση.

Β) Πριν από τη διαμόλυνση, τα πρωτεύοντα κυτταρικά μέσα αφαιρέθηκαν και πλύθηκαν 1-2 φορές με PBS πριν αντικατασταθούν 1,8 mL βασικού μέσου χωρίς ορό ή χαμηλό ορό (κάτω από 5%) ή Opti-MEM. διαφορετικά κύτταρα είχαν διαφορετική εξάρτηση από τον ορό ανάλογα με τον συγκεκριμένο τύπο κυττάρου.

Γ) Τα επικολλημένα κύτταρα τοποθετήθηκαν στον επωαστήρα και ξεκίνησε η προετοιμασία των συμπλοκών επιμόλυνσης.

2. Τα κύτταρα εναιωρήματος παρασκευάστηκαν πριν από τη διαμόλυνση:

Α) Την ημέρα της επιμόλυνσης, μια κατάλληλη ποσότητα κυττάρων φυγοκεντρήθηκε για να απομακρυνθεί το μέσο

και επαναιωρήθηκε με βασικό μέσο χωρίς ορό ή χαμηλό ορό (κάτω από 5%).

Β) Τα παρασκευασμένα κύτταρα εναιωρήματος τοποθετήθηκαν στον επωαστήρα και ξεκίνησε η παρασκευή του

σύμπλοκα μορφομετατροπής και η αναλογία όγκου μεταξύ των συμπλοκών επιμόλυνσης και του μέσου θα μπορούσε

να γίνει με αναφορά σε προσκολλημένα κύτταρα για κατάλληλες προσαρμογές.

3. Παρασκευάστηκαν σύμπλοκα επιμόλυνσης:

Α) Υγρό παρασκευής Α: 100 μL μέσου βάσης χωρίς ορό και 2 ug πλασμιδικού DNA, εμφύσηση και

μικτός;

Β)Παρασκευή υγρού Β: 100 L βασικού μέσου χωρίς ορό και 6-8 μL PEI 40 K Μεταμόλυνση

Αντιδραστήριο, εμφύσηση και ανάμιξη.

Γ) Το διάλυμα Β προστέθηκε στο υγρό Α, φυσήθηκε απαλά και αναμίχθηκε και επωάστηκε σε θερμοκρασία δωματίου για

15 λεπτά για να σχηματιστεί ένα σύμπλοκο επιμόλυνσης DNA-PEI.

4. Επιμολυσμένα κύτταρα:

Α) Προσθέστε το σύμπλοκο μορφομετατροπής που λήφθηκε στο προηγούμενο βήμα στην προηγουμένως αλλαγμένη πλάκα οπών κατά

διέλευση ή περικύκλωση του διαλύματος.

Β) Ανακινήστε την πλάκα "8" ή άλλο τρόπο για να αναμειχθεί πλήρως και να επωαστεί σε επωαστήρα 37 βαθμών, 5% CO2.

Γ) Τα σύμπλοκα επιμόλυνσης DNA-PEI με κύτταρα για 4 – 6 ώρες έδειξαν καλύτερη αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης,

κατάλληλη επέκταση ή ολονύκτια επώαση και καλύτερη αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης.

1. Χρησιμοποιήστε υγιή κύτταρα σε καλή κατάσταση και τα ανακτημένα κύτταρα συνιστάται να περάσουν τουλάχιστον 2 φορές πριν από τη διαμόλυνση.

2. Χρησιμοποιήστε ένα υψηλής ποιότητας, απαλλαγμένο από ενδοτοξίνες, πλασμιδικό DNA.

3. Για την αρχική χρήση, συνιστάται η χορήγηση του προϊόντος για την αποφυγή επαναλαμβανόμενης κατάψυξης και απόψυξης.

4. Οι υψηλές συγκεντρώσεις ορού κατά τη διαμόλυνση, καθώς και η χρήση αντιβιοτικών, μπορεί να επηρεάσουν την κατάσταση των κυττάρων καθώς και την αποτελεσματικότητα της επιμόλυνσης.

5. Η διαφορετική ανοχή κυττάρων, η ευαισθησία, η διάρκεια του χρόνου επώασης της επιμόλυνσης και η αναλογία χρήσης PEI/DNA προσαρμόστηκαν ανάλογα.

6. Φοράτε πειραματικές στολές και γάντια μιας χρήσης κατά τη λειτουργία.

Πρόγραμμα: Χρήση επιμόλυνσης σε διαφορετικούς περιέκτες κυτταροκαλλιέργειας (μόνο για αναφορά)

Μόνο για ερευνητική χρήση!

Δημοφιλείς Ετικέτες: αντιδραστήριο διαμόλυνσης pei 40k, Κίνα κατασκευαστές αντιδραστηρίων επιμόλυνσης pei 40k, προμηθευτές, εργοστάσιο