SweMagrose IDA-Co Magnetic Agarose Beads For His-Tag Protein Purification

 

Όνομα προϊόντος	Γάτα. Οχι.	Spec.
SweMagrose IDA-Co Μαγνητικές Χάντρες Αγαρόζης για Καθαρισμό Πρωτεϊνών His-Tag	G3655-1ML	1 mL
	G3655-5ML	5 mL

 

 

Αυτό το προϊόν παρασκευάζεται από μαγνητικά σφαιρίδια αγαρόζης τροποποιημένα με IDA και χηλικά ιόντα νικελίου. Μπορεί να καθαρίσει αποτελεσματικά και γρήγορα τις επισημασμένες με ιστιδίνη πρωτεΐνες σε βιολογικά δείγματα χωρίς φυγοκεντρική διήθηση. Η επέμβαση είναι απλή και κατάλληλη για τον καθαρισμό διαλυτών πρωτεϊνών ετικέτας ιστιδίνης που εκφράζονται στο υπερκείμενο ή κύτταρα βακτηρίων, ζυμομυκήτων και κυττάρων. Μπορεί επίσης να συνδυαστεί με εξοπλισμό καθαρισμού πρωτεΐνης υψηλής απόδοσης για έλεγχο και διαχωρισμό πρωτεϊνών.

Το Co2+ έχει 4 συνδέτες και λιγότερη μη ειδική προσρόφηση, το Ni2+ έχει 6 συνδέτες και ισχυρή ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών, για περισσότερες πρωτεΐνες-στόχους, μπορείτε να επιλέξετε τα άλλα SweMagrose IDA-Ni Magnetic Agarose Beads για το His -Καθαρισμός πρωτεΐνης ετικέτας (G3654).

 

 

Αποστολή με υγρό πάγο. Αποθηκεύεται στους 4 βαθμούς, ισχύει για 12 μήνες.

 

 

Αριθμός εξαρτήματος	Συστατικό	G3655-1ML	G3655-5ML
G3655	SweMagrose IDA-Co Μαγνητικές Χάντρες Αγαρόζης για Καθαρισμό Πρωτεϊνών His-Tag	1 mL	5 mL
Εγχειρίδιο		1 τεμ

 

 

1. Η διαμόρφωση διαφόρων αντιδραστηρίων μπορεί να αναφέρεται ως εξής. Οι χρήστες μπορούν να επιλέξουν την κατάλληλη ποσότητα μαγνητικών σφαιριδίων και φόρμουλα ρυθμιστικού διαλύματος ανάλογα με την κατάσταση των αντιδραστηρίων.

Συστατικό	Τόμος
10×PBS (200 mM φωσφορικό νάτριο, pH7,4)	50 mL
10x ρυθμιστικό διάλυμα ιμιδαζόλης (200 mM φωσφορικό νάτριο, 5 M ιμιδαζόλη, pH 7,4)	50 mL
Αφαίρεση κοβαλτίου (10 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 100 mM EDTA, pH7,4)	10 mL
Αλκαλικό διάλυμα πλύσης (0.5 M NaOH, 2 M NaCl)	10 mL
href="javascript:;" Θειικό κοβάλτιο (100 mM CoSO4)	15 mL
Διάλυμα συντήρησης (20% αιθανόλη)	50 mL

 

2. Διαμόρφωση buffer

Η απόδοση δέσμευσης της πρωτεΐνης στόχου με χηλικά σφαιρίδια μεταλλικών ιόντων θα επηρεάσει άμεσα την αποτελεσματικότητα καθαρισμού της πρωτεΐνης στόχου και διάφορα ρυθμιστικά διαλύματα θα επηρεάσουν επίσης την ανάκτηση και την καθαρότητα της πρωτεΐνης στόχου σε κάποιο βαθμό. Επομένως, πριν από καθαρισμό πρωτεΐνης μεγάλης κλίμακας, οι χρήστες θα πρέπει να σχεδιάσουν τα δικά τους πειράματα για την εξέταση των ρυθμιστικών διαλυμάτων που είναι κατάλληλα για την πρωτεΐνη-στόχο, συμπεριλαμβανομένου του ρυθμιστικού διαλύματος σύνδεσης, του ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης και του ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης. Το ρυθμιστικό σύστημα που παρέχεται παρακάτω είναι κατάλληλο για τον καθαρισμό των περισσότερων πρωτεϊνών ετικέτας ιστιδίνης για αναφορά χρηστών.:

Ρυθμιστικό διάλυμα δέσμευσης: 20 mM φωσφορικό νάτριο, 500 mM NaCl, 5~50 mM ιμιδαζόλη, pH 7,4

Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης: 20 mM φωσφορικό νάτριο, 500 mM NaCl, 50~100 mM ιμιδαζόλη, pH 7,4

Ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης: 20 mM φωσφορικό νάτριο, 500 mM NaCl, 500 mM ιμιδαζόλη, pH 7,4

3. Δείγμα επεξεργασίας

α) E. coli, ζυμομύκητες και άλλες ενδοκυτταρικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες: προσθέστε 5~10 mL ρυθμιστικού διαλύματος δέσμευσης ανά γραμμάριο κυττάρων, προσθέστε αναστολέα πρωτεάσης (π.χ. PMSF σε τελική συγκέντρωση 1 mM), επαναιωρήστε τα κύτταρα και λύστε το με υπερήχους κύτταρα σε ένα λουτρό πάγου, δηλαδή το δείγμα ακατέργαστης πρωτεΐνης. Εάν το δείγμα είναι πολύ παχύρρευστο, η κατάλληλη ποσότητα νουκλεάσης μπορεί να προστεθεί στο ακατέργαστο δείγμα όπως χρειάζεται και να τοποθετηθεί σε πάγο για 30 λεπτά για να αποικοδομηθούν τα νουκλεϊκά οξέα. Εναλλακτικά, μπορεί να πραγματοποιηθεί φυγοκέντρηση του δείγματος πρωτεΐνης όπως απαιτείται.

β) Εξωκυτταρική εκφρασμένη πρωτεΐνη: Το δείγμα ακατέργαστης πρωτεΐνης ελήφθη όταν το υπερκείμενο εξωκυτταρικής έκφρασης αραιώθηκε με ίση ποσότητα ρυθμιστικού διαλύματος σύνδεσης.

γ) Ενδοκυτταρικά εκφρασμένες πρωτεΐνες σε ζωικά κύτταρα: Πάρτε την κατάλληλη ποσότητα ζωικών κυττάρων, πλύνετε με κατάλληλη ποσότητα PBS (αυτοπαρεχόμενη) μία φορά, απορρίψτε το υπερκείμενο, επαναιωρήστε με κατάλληλη ποσότητα ρυθμιστικού διαλύματος σύνδεσης που περιέχει 1% (v/v) Triton X -100 ή 1% (v/v) NP-40, προσθέστε αναστολέα πρωτεάσης (π.χ. PMSF σε τελική συγκέντρωση 1 mM) και βάλτε το σε πάγο για 10 λεπτά, δηλαδή δείγμα ακατέργαστης πρωτεΐνης.

4. Σύνδεση της πρωτεΐνης στόχου με μαγνητικά σφαιρίδια:

α) Εναιωρήστε 2 g υγρού βάρους των οργανισμών με 10 mL ρυθμιστικού διαλύματος δέσμευσης και μετά τον κατακερματισμό και τη λύση, ένα δείγμα της ακατέργαστης πρωτεΐνης στόχου προστίθεται σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης που περιέχει προεπεξεργασμένα μαγνητικά σφαιρίδια και ο σωλήνας τοποθετείται σε μίξερ vortex και ανακινήστε για 15 δευτερόλεπτα. Το δείγμα ακατέργαστης πρωτεΐνης στόχου προστίθεται στη συνέχεια σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης με προεπεξεργασμένα μαγνητικά σφαιρίδια.

β) Τοποθετήστε τον σωλήνα φυγοκέντρησης σε περιστροφικό μίξερ για 20-30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (εάν χρειάζεται, μπορεί να περιστραφεί και να αναμιχθεί για 1 ώρα σε χαμηλή θερμοκρασία 2-8 βαθμών για να αποφευχθεί η αποικοδόμηση της πρωτεΐνης στόχου) .

γ) Τοποθετήστε το σωλήνα φυγοκέντρησης στον μαγνητικό διαχωριστή για διαχωρισμό, μεταφέρετε το υπερκείμενο σε έναν νέο σωλήνα φυγοκέντρησης για μετέπειτα δοκιμή και αφαιρέστε το σωλήνα φυγοκέντρησης από τον μαγνητικό διαχωριστή για τα επόμενα βήματα πλύσης.

5. Πλύσιμο με μαγνητικά σφαιρίδια:

α) Προσθέστε 10 mL ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης στο σωλήνα φυγοκέντρησης που περιέχει τα μαγνητικά σφαιρίδια, περιστρέψτε απαλά τον σωλήνα αρκετές φορές για να επαναιωρήσετε τα σφαιρίδια, διαχωρίστε τα μαγνητικά και μεταφέρετε το διάλυμα πλύσης σε νέο σωλήνα φυγοκέντρησης για δειγματοληψία. Επαναλάβετε αυτή τη διαδικασία μία φορά.

β) Προσθέστε 10 mL ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης στο σωλήνα φυγοκέντρησης που περιέχει μαγνητικά σφαιρίδια για να επαναιωρήσετε τα σφαιρίδια, μεταφέρετε το εναιώρημα σφαιριδίων σε νέο σωλήνα φυγοκέντρησης (για να αποφύγετε τη μόλυνση των πρωτεϊνών-στόχων από μη ειδικά προσροφημένες πρωτεΐνες στο τοίχωμα του αρχικού σωλήνα φυγοκέντρησης ), διαχωρίστε μαγνητικά και μεταφέρετε με σιφώνιο το υπερκείμενο υγρό στο Wash Buffer Collection Tube.

6. Έκλουση πρωτεΐνης στόχου

α) Οι χρήστες μπορούν να προσαρμόσουν τη συγκέντρωση της πρωτεΐνης στόχου αλλάζοντας τον όγκο έκλουσης όπως απαιτείται. Προσθέστε 2-10 mL ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης, γυρίστε απαλά το σωληνάριο αρκετές φορές για να αιωρηθούν τα σφαιρίδια, διαχωρίστε μαγνητικά τα σφαιρίδια και συλλέξτε το έκλουσμα σε ένα νέο σωλήνα φυγοκέντρησης, που είναι το καθαρισμένο δείγμα πρωτεΐνης στόχου.

α) Εάν είναι απαραίτητο, επαναλάβετε τα παραπάνω βήματα μία φορά για να συλλέξετε το δείγμα σε νέο σωλήνα φυγοκέντρησης για να ελέγξετε εάν η πρωτεΐνη στόχος έχει εκλουστεί πλήρως.

β) Ανιχνεύστε την πρωτεΐνη στόχο με SDS-PAGE ή Western blotting. Εάν χρειάζεται να μετρήσετε τη συγκέντρωση πρωτεΐνης, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε το ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης για να μηδενίσετε τη συγκέντρωση ή να χρησιμοποιήσετε αιμοκάθαρση ή υπερδιήθηση για να αφαιρέσετε το Imidazole και στη συνέχεια να μετρήσετε τη συγκέντρωση.

7. Μετα-επεξεργασία μαγνητικής χάντρας

α) Προσθέστε 5 mL ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης στο σωλήνα φυγοκέντρησης που περιέχει τα μαγνητικά σφαιρίδια, γυρίστε το σωληνάριο πάνω-κάτω αρκετές φορές για να αιωρηθούν τα σφαιρίδια, διαχωρίστε τα μαγνητικά και αφαιρέστε το υπερκείμενο.

β) Επαναλάβετε τα παραπάνω βήματα δύο φορές.

γ) Προσθέστε 5 mL ddH O στο σωλήνα φυγοκέντρησης που περιέχει τα μαγνητικά σφαιρίδια, γυρίστε το σωληνάριο πάνω-κάτω αρκετές φορές για να αιωρηθούν τα σφαιρίδια, διαχωρίστε τα μαγνητικά και αφαιρέστε το υπερκείμενο.

δ) Επαναλάβετε τα παραπάνω βήματα δύο φορές.

ε) Προσθέστε το διάλυμα συντήρησης στα μαγνητικά σφαιρίδια για να δημιουργήσετε συνολικό όγκο 5 mL, αποθηκεύστε σε 2-30 βαθμό (για μακροχρόνια αποθήκευση, τοποθετήστε σε 2-8 βαθμό) και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για επόμενο καθαρισμό της ίδιας πρωτεΐνης.

8. Αναγέννηση μαγνητικών σφαιριδίων

Όταν τα μαγνητικά σφαιρίδια χρησιμοποιούνται συνεχώς για 3 ή περισσότερες φορές, η ικανότητα δέσμευσης πρωτεϊνών-στόχων μπορεί να μειωθεί σημαντικά και συνιστάται η διεξαγωγή της διαδικασίας αναγέννησης μαγνητικών σφαιριδίων. Πάρτε 5 mL αιωρήματος μαγνητικών σφαιριδίων 10% (v/v) ως παράδειγμα για να επεξηγήσετε λεπτομερώς τη λειτουργία αναγέννησης μαγνητικών σφαιριδίων.

α) Το εναιώρημα μαγνητικού σφαιριδίου διαχωρίστηκε μαγνητικά, αφαιρέστε το υπερκείμενο και αφαιρέστε το σωλήνα φυγοκέντρησης από τον μαγνητικό διαχωριστή, προσθέστε 5 mL ddH2O στο σωλήνα φυγοκέντρησης και γυρίστε τον φυγοκεντρικό σωλήνα πάνω-κάτω αρκετές φορές για να αιωρήσετε ξανά τα μαγνητικά σφαιρίδια , διαχωρίζεται μαγνητικά και αφαιρείται το υπερκείμενο.

β) Προσθέστε 5 mL αφαίρεσης κοβαλτίου, γυρίστε τον σωλήνα φυγοκέντρησης πάνω-κάτω πολλές φορές για να επαναιωρήσετε τα μαγνητικά σφαιρίδια, περιστρέψτε και ανακατέψτε για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, διαχωρίστε μαγνητικά και αφαιρέστε το υπερκείμενο. Επαναλάβετε αυτό το βήμα μία φορά.

γ) Προσθέστε 5 mL ddH2O στο σωλήνα φυγοκέντρησης που περιέχει τα μαγνητικά σφαιρίδια, γυρίστε το σωληνάριο πάνω-κάτω αρκετές φορές για να αιωρηθούν τα σφαιρίδια, διαχωρίστε τα μαγνητικά και αφαιρέστε το υπερκείμενο.

δ) Αλκαλική επεξεργασία (προαιρετικό βήμα): προσθέστε 5 mL αλκαλικού ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης, γυρίστε τον σωλήνα φυγοκέντρησης πάνω-κάτω αρκετές φορές για να επαναιωρήσετε τα σφαιρίδια, περιστρέψτε και ανακατέψτε για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, διαχωρίστε μαγνητικά και αφαιρέστε το υπερκείμενο. Προσθέστε 5 mL ddH2O, γυρίστε το σωληνάριο φυγοκέντρησης πάνω-κάτω αρκετές φορές για να επαναιωρήσετε τα σφαιρίδια, διαχωρίστε μαγνητικά και αφαιρέστε το υπερκείμενο. Επαναλάβετε το βήμα πλύσης ddH2O 3-5 φορές μέχρι το διάλυμα πλύσης να είναι ουδέτερο.

ε) Προσθέστε 5 mL χλωριούχου νικελίου, γυρίστε το σωλήνα φυγοκέντρησης πάνω-κάτω αρκετές φορές για να αιωρήσετε ξανά τα σφαιρίδια, περιστρέψτε και ανακατέψτε για 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, διαχωρίστε μαγνητικά και αφαιρέστε το υπερκείμενο.

στ) Προσθέστε 5 mL ddH2O και γυρίστε τον σωλήνα φυγοκέντρησης πάνω-κάτω αρκετές φορές για να επαναιωρήσετε τα σφαιρίδια, διαχωρίστε μαγνητικά και αφαιρέστε το υπερκείμενο. Επαναλάβετε αυτό το βήμα 4 φορές.

ζ) Προσθέστε το διάλυμα συντήρησης στα μαγνητικά σφαιρίδια για να σχηματιστεί συνολικός όγκος 5 mL και αποθηκεύστε σε 2-30 βαθμό (για μακροχρόνια αποθήκευση, τοποθετήστε σε 2-8 βαθμό ).

 

 

1. Αυτό το προϊόν αποθηκεύεται σε αιθανόλη 20% και πρέπει να αντικατασταθεί πριν από τη χρήση.

2. Μην καταψύχετε ή στεγνώνετε τις χάντρες, καθώς αυτό μπορεί να επηρεάσει την τελική χρήση.

3. Χρησιμοποιήστε το με αντίστοιχο μαγνητικό πλαίσιο.

 

Μόνο για ερευνητική χρήση. Δεν προορίζεται για χρήση σε διαγνωστικές ή θεραπευτικές διαδικασίες!

 

 

Δημοφιλείς Ετικέτες: swemagrose ida-co σφαιρίδια μαγνητικής αγαρόζης για καθαρισμό πρωτεΐνης his-tag, Κίνα swemagrose ida-co σφαιρίδια μαγνητικής αγαρόζης για κατασκευαστές καθαρισμού πρωτεΐνης his-tag, προμηθευτές, εργοστάσιο